【技術(shù)貼】如何進(jìn)行低風(fēng)險的無菌檢測
無菌藥品的生產(chǎn)是要求嚴(yán)格、風(fēng)險大的制藥生產(chǎn)——新版GMP對無菌生產(chǎn)的要求變化大，標(biāo)準(zhǔn)起點高，從而對藥品生產(chǎn)控制和產(chǎn)量質(zhì)量有更好的保證。中國制藥企業(yè)正面臨著新一輪無菌控制水平提升的挑戰(zhàn)，無菌檢測顯得尤為重要。
根據(jù)國際法規(guī)(USP<71>, EP 2.6.1, JP, WHO QAS/11.413, cGMP, CHP2015等)的規(guī)定，無菌檢測不僅適用于注射藥物，也適用于檢測藥典中規(guī)定的無菌的醫(yī)藥產(chǎn)品，包括原輔料、眼藥水、無菌器械等。常見的無菌產(chǎn)品劑型為：液體或粉末、藥膏或油狀，固體形態(tài)，懸浮液和乳液等，這些產(chǎn)品在終放行前都必須要測試微生物污染狀況。隨著2015版中國藥典的實施以及病原微生物對人類健康的潛在影響，讓人們更加了解到“無菌檢查”的重要性。 無菌檢驗原理是基于“薄膜過濾”的方法，它可以把微生物從各種樣品中富集，同時經(jīng)過沖洗去除、中和抑制物質(zhì)，灌入TSB、FTM培養(yǎng)基，經(jīng)過14天的培養(yǎng)，觀察樣本在不同培養(yǎng)基內(nèi)濁度：無渾濁意味著通過無菌檢查！ 不過，即便供試品符合無菌檢查法的規(guī)定,也僅表明了供試品在該檢驗條件下未發(fā)現(xiàn)微生物污染，并不代表整批產(chǎn)品全部無菌。因為無菌檢查本身也有一定的局限性，比如微生物的污染不均勻分布，檢驗方法的有效性以及實驗用品的局限性等。 按照新的微生物檢測理念，為了讓無菌檢查能夠大限度的反應(yīng)整批產(chǎn)品的質(zhì)量情況，避免出現(xiàn)假陰性或者假陽性的情況，您需要關(guān)注實驗流程中的每一個細(xì)節(jié)，包括操作風(fēng)險，取樣數(shù)量風(fēng)險，A級環(huán)境維持和監(jiān)測風(fēng)險，SOP方法驗證，培養(yǎng)基的適用性檢查，儀器設(shè)備的自身風(fēng)險，實驗用耗材的風(fēng)險控制，結(jié)果判定的風(fēng)險等。 細(xì)節(jié)決定成敗，在完善細(xì)節(jié)的同時，您是否曾經(jīng)也有以下問題？ 哪些因素可能導(dǎo)致假陽性或者假陰性？ 怎樣證明實驗操作區(qū)域無菌？A級區(qū)浮游菌如何監(jiān)測風(fēng)險低？ 選擇無菌濾筒應(yīng)該關(guān)注哪些方面？如何驗收？怎樣保證濾筒使用前后的濾膜完整性？ 無菌檢測設(shè)備的使用風(fēng)險？ 陽性對照的目的是什么？應(yīng)該怎樣做風(fēng)險低？ 下面就讓我們一一擊破這些困惑！ 導(dǎo)致假陽性或者假陰性影響因素： 1 假陽性 實驗結(jié)果呈陽性，但污染并不是來源于產(chǎn)品本身，而是來源于檢驗環(huán)境污染未檢出、人員操作、實驗用品、濾筒污染、培養(yǎng)基污染等方面。企業(yè)需要花費大量的人力、物力和時間去進(jìn)行調(diào)查。 2 假陰性 實驗結(jié)果呈陰性，但產(chǎn)品本身存在微生物污染，這種風(fēng)險可能會導(dǎo)致產(chǎn)品召回、醫(yī)療賠償、品牌貶值等嚴(yán)重后果。 假陰性的來源主要因素有： ● 培養(yǎng)基不合格 ● 方法有效性問題，未完全去除抑制 ● 無菌檢測設(shè)備的物理殺傷，如設(shè)備剪切力，發(fā)熱影響 ● 無菌檢測設(shè)備的物理殺傷，如設(shè)備剪切力，發(fā)熱影響 ● VHP滅菌后，無菌濾筒中有消毒劑殘留 ● 無菌濾筒本身含有少量化學(xué)抑制劑 ● 無菌濾筒的換氣濾器破損或者產(chǎn)生大量氣泡 無菌檢測環(huán)境監(jiān)控： 按照新的法規(guī)要求，無菌檢測需要在具有潔凈室等級A級的隔離室中進(jìn)行或者B+A級潔凈環(huán)境中進(jìn)行，在這樣的環(huán)境下，需要對包括懸浮粒子、浮游菌、沉降菌、表面微生物及物理參數(shù)進(jìn)行監(jiān)測以保證環(huán)境的合格， 其中浮游菌的監(jiān)測要求為A級 <1 cfu/m3，B級 <10 cfu/m3。 在GMP指南內(nèi)介紹了過濾法、撞擊法（多孔篩網(wǎng)、狹縫式）等可用于浮游菌監(jiān)測。而撞擊法是目前常用的方法，但是方法本身具有一定的局限性。 比如設(shè)備的采樣頭因為是孔式結(jié)構(gòu)，不可能做到100%的物理截留，浮游菌的真實值往往需要通過對檢測值進(jìn)行數(shù)據(jù)校正，這會每次結(jié)果帶來20-30%的假陰性風(fēng)險。 另外采樣頭需要消毒，消毒的效果和消毒劑殘留很難評估，也可能會帶來假陽性、假陰性的風(fēng)險 因為采樣時使用配置好的平板培養(yǎng)基，在A級區(qū)使用時需要多層無菌包裝，長時間采樣培養(yǎng)基會丟失水分，如需連續(xù)采樣，需要不停地在A級區(qū)更換培養(yǎng)基，這個操作本身也會對環(huán)境產(chǎn)生不利影響。
